1． 我们引物合成报告单上的所有数据都是由软件系统根据同一组原始数据自动计算生成的。报告单里包含每条oligo的分子量、OD数、每OD的nmole数、两种离子浓度下的TM值、GC含量等参数信息。所以该编号Oligo DNA的实际序列与引物合成报告单上打印的完全一致。如果打印序列与你的定单不同请立即与我们联系。

2． 我们使用紫外分光光度计对Oligo DNA进行定量。在1cm光程260nm波长下的吸光度（A值），即为1mL该溶液中含Oligo DNA的OD数。根据文献数据，1OD260的单链寡核甘酸大约相当于33µg，但受碱基组成的影响较大。我们通过软件为每条寡核甘酸提供了更准确的nmol数。

       也可以作以下近似计算：摩尔数=OD数×33µg/OD÷（碱基数×324.5g/mol）。

3． TM值的选择。

我们提供两种[Na﹢]当量离子浓度下的TM值。典型PCR反应体系的[Na﹢]当量浓度一般在0.2M-0.5M之间。普通PCR反应建议第一次摸索条件时使用0.05M[Na﹢]当量下上下游引物的TM平均值；如果用于接头退火建议使用1M[Na﹢]当量下的TM值。

4． 引物合成中的耦合效率(Coupling Efficiency)是根据合成最后一个碱基时脱下来的DMT保护基的量与合成第二个碱基时脱下来的DMT保护碱基的量的比值计算出来的。它反映的是一个平均耦合效率。引物原始质量的好坏主要体现在这些合成和氨解的化学反应上，如果这些步骤出了问题，一般的纯化都将无法弥补其造成的影响。

5． 高质量的DNA应该是呈透明的薄膜状附在离心管底部或管壁。也有少量为白色粉末（跟序列有关）。开盖溶解前请先离心，避免损失。我们推荐用螺旋管装盛引物，这样能避免压盖管开盖带来的损失。

6． Oligo的稀释与保存。我们普通PCR引物的建议溶解浓度为10µM(10pmol/µl)，反应浓度为0.2µM(0.2pmol/µl)。稀释到10µM浓度需加TEbuffer（或者双蒸水）的体积（µl）=每管的OD数*nmol/OD*100。常规引物在干粉状态下能-20℃保存一年。

7． 关于PCR反应体系。建议配合使用我们公司提供的酶和buffer，能使您的实验达到最佳效果。

8． 荧光标记的稀释与保存。FAM、FITC、HEX、TET、cy3、cy5等对光敏感的基团，在运输和使用过程中应尽可能避光保存。cy3和cy5标记的引物在碱性条件下容易降解，所以此类引物不宜用TE溶液溶解，应于中性条件下-20℃避光保存。

9． 我们提供的Oligo DNA的5’端和3’端均为羟基，若需要磷酸基团的必须另作处理。

10． 您的所有引物合成的信息我们将严格保密，两年内随时供您查询。

11． 我们还将为您保留少量样品，如果您不小心丢失或者用量不够，我们可以免费再提供小样。

12． 如果您提供模板序列或者NCBI基因序列号，我们为您可以免费设计引物。经您确认后，再将合成好的引物送到您处。需要说明的是引物设计有一定的风险，根据实验不同成功率可以从50%-99%。我们不承担此类风险责任。

13． 如果您在到货后一个月内未提出异议，我们将视此产品为合格，不再受理索赔事宜。

14． 常用简并碱基代码：

Q1.引物合成的过程？引物是如何合成的？

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种,无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。

(1)    去保护：加入Deblocking脱去碱基上5'- OH的保护基团DMT，获得游离的5'- OH；

(2)    耦合：同时加入活化剂和新的碱基，新的碱基5'-OH仍然被DMT保护，3'端被活化与溶液中游离的5'-OH发生耦合反应；

(3)    封闭：耦合反应中极少数5'- OH没有参加反应，用封闭试剂终止其后继续发生反应；

(4)    氧化：加入氧化剂使其由核苷亚磷酸酯形成更稳定的核苷磷酸酯。

Q2.引物合成如何处理？

切割与脱保护基：将合成好的寡核苷酸链从支持物上化学切割下来。常用新鲜的浓氨水来裂解CPG与初始核苷之间的酯键。断裂下来的寡核苷酸带有自由的3’羟基。

纯化：根据所合成寡核苷酸的组成和应用来选定纯化的方法。常用的纯化方法有：C18、OPC、PAGE和HPLC。

定量：根据寡核苷酸在260nm处的紫外吸收来定量。

储存：分装抽干。

Q3.合成的引物5’端是否有磷酸化？

合成的引物5’为羟基，没有磷酸基团。如果需要您可以用多核苷酸激酶进行5’端磷酸化，或者要求我们合成时直接在5’或3’端进行磷酸化，需要另外收费。