B005 动物细胞程序性死亡检测试剂盒 10T ￥500.00
25T ￥1000.00
B006 植物细胞程序性死亡检测试剂盒 10T ￥700.00
25T ￥1400.00
概述：
在有核的真核细胞,有两种在形态学上均不同的死亡方式,即细胞坏死(Necrosis)和细胞凋亡(apoptosis),后者是一个主动、固有的程序化现象,故又称细胞程序性死亡(programmed cell death ,PCD),鉴于细胞凋亡即程序性细胞死亡(Apoptosis) 是近年来国内外兴起的又一热门课题,应广大用户需求和我们科研人员的辛勤劳作,在不到一年的时间内 ,我们开发了关于细胞凋亡的系列产品,(见本公司产品目录)现向广大用户特别推荐程序细胞检测试剂盒 ，本试剂盒可用于原位检测细胞凋亡情况，通过显色反应，可在显微镜下观察到被着色的程序性死亡细胞。
试剂盒组成:
1. 溶液A（固定液）： 10ml 4%多聚甲醛，用于固定，可很好地保存细胞形态
2. 溶液B（TdT酶）： 25ul
3. 溶液C（反应缓冲液）:250ul
4．溶液D（显色液）: 6.25ul 实验时溶于1.2ml缓冲液B，40ul/管分装,
-20℃保存
5．溶液E（显色反应液）:2.5ul，实验时溶于1.2ml缓冲液A，40ul/管分装，
-20保存
6. 溶液F（30%H2O2）：用时用甲醇溶解成0.3%H2O2
7. 溶液G（0.5%甲基绿）： 1ml
实验前准备:
1. 配制PBS 100ml。
2. 配制缓冲液A:0.15N NaCl,0.1M Tris/HCl, PH7.5 。
3. 配制缓冲液B:0.15N NaCl, 50mM MgCl2,0.1M Tris/HCl, PH9.0 。
4. 配制封闭液:3%BSA(0.15N NaCl,0.1M Tris/HCl, PH7.5) 。
5. 配制Proteinase K:(20ug/ml) 10mM Tris/HCl, PH 7.4-8.0 。
6. 按试剂盒说明稀释溶液，并分装成小管保存 。
细胞固定操作步骤:
实验用玻片:清洗干净，75%酒精放置 。
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细胞样品 |
² 固定溶液：4% 多聚甲醛（pH7.4 PBS 溶液配制）
² 渗透液:0.1% Triton X-100(溶于柠檬酸钠溶液)
² 4%多聚甲醛固定,室温30分钟,离心涂片。 |
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石蜡组织切片 |
² 二甲苯和乙醇100%、95%、90%、80%、70%，用蒸馏水稀释
² 常规脱蜡 。
² 蛋白酶K，10～20ug/ml，溶于Tris/HCl中，21-37℃ 15-30分钟 。 |
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冰冻组织切片 |
² 固定溶液：4% 多聚甲醛（pH7.4 PBS 溶液配制）
² 渗透液:0.1% Triton X-100(溶于柠檬酸钠溶液)
² 用4%多聚甲醛固定过夜 。
² 用PBS清洗两次共10分钟 。 |
内源性酶终止:
1. PBS洗 一次，5分钟。
2. 加入0.3%H2O2(甲醇溶解)，室温30分钟。
3. PBS洗两次，每次2分钟。
4. 加0.1%Triton X-100(0.1%醋酸钠配制)，冰浴2分钟 。
标记:
1. PBS洗两次，每次2分钟。
2. 凉干。
3．用划圈油在标本外划圈然后滴加10ul反应液 (1ul酶和9ul反应缓冲液
混匀)于标本，置温盒37℃ 60分钟(阴性对照不加酶)。
4. Buffer A洗2次，每次1分钟。
显色:
1. 加入封闭液50ul，25-37℃ 30分钟。
2. 弃封闭液。
3. 加入显色反应液40ul. 25-37℃ 30-60分钟。
4. Buffer B洗2次，每次1分钟。
5. 加入40ul显色液，置于暗盒中20分钟。
6. Buffer B洗2次，每次1分钟。
7. 0.5%甲基绿复染20秒。
8. 显微镜下观察有蓝紫色颗粒者为阳性。
