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A023 (一步法)动物总RNA提取试剂盒
作者:周卫东 来自:鼎国公司 点击:0 时间:2006-7-11

组成: 

                                                                       

1.溶液A(RNA 变性液<4N异硫氰酸胍,20mM NaAc PH5.2

0.1Mβ-巯基乙醇,0.5%十二烷基肌氨酸钠>):

60ml

-20℃

2.溶液B(氯仿):

6ml

4℃

3.溶液C(抽提液<酚:氯仿:异戊醇=24:24:1>):

60ml

4℃

4.溶液D(3M NaAc(PH5.2)):

3ml

4℃

5.溶液E(水):

3ml

4℃

6.溶液F(水):(配75%乙醇用)

10ml

4℃

 

实验步骤:

1.a)血清或骨髓样品,可分离白细胞,留取107白细胞。

   b)培养细胞可收集107细胞,充分震荡。

   c)组织细胞直接取100mg,在电动匀浆器中将其匀浆或液氮研磨。

2. 向样品管中加入2000ul裂解液,充分震荡,使沉淀完全溶解。

3.≥12000rpm 离心5分钟,弃沉淀。

4. 加200 ul氯仿充分混匀,12000rpm离心5分钟。

5. 小心吸取上层水相,加入等体积抽提液,温和混匀,12000rpm离心3分钟。

6. 重复步骤5一次。

7. 吸取上清,加1/10体积3N醋酸钠(PH5.2),1倍体积的异丙醇,-20℃放置

20分钟至1小时。

8. 12000rpm离心10分钟,弃上清,

9. 加入500ul 75%的乙醇,振荡混匀 12000rpm离心10分钟,弃上清。

10. 重复步骤 9

11.室温晾干,约30分钟或4℃冰箱过夜。

12.加入约50ul 水溶解。

13.测OD值计算RNA含量。

14.RNA电泳,紫外灯下可清晰可见18S,28S RNA带。

 

试剂盒说明:

1 本试剂盒可于-20℃稳定保存一年有效。

2 本试剂盒提取RNA为细胞总RNA,纯度能达到分子生物学各种要求

3 细胞量不宜过多,如需大量提取RNA,可按比例相应扩大RNA裂解液的量.

4 只用本试剂盒所带水.

5 组织每增加100mg,相应试剂要增加一倍。

6所用耗材均DEPC水处理,所用玻璃器皿均需180℃烘烤8-12hr,方能消除RNase的污染。


责任编辑:xoyu 文章页数第[1]页 


 
相关链接
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