A014-1 DNA快速纯化/回收试剂盒(50次)
作者:周卫东 来自:鼎国公司 点击:0 时间:2006-7-11
概述: 本试剂盒可从溶液或琼脂糖中回收DNA片段,不含盐、蛋白质、RNA等杂质,纯度与Cs密度梯度离心相仿。500bp以上片段,回收率90%以上,200bp~500bp回收率80%以上,100bp~200bp回收率60%。可回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。此方法原理:本试剂盒所带Resin质子化以后,具有在高盐、低pH值情况下吸附DNA,低盐、高pH值情况下释放DNA的性质。 组成: 1. 离心柱 50个 柱上含有树脂。 2. 溶液A 50ml 6M NaClO4,0.03M NaAc,pH5.2,少量酚红。 3. 溶液B 1ml 3M NaAc。 4. 溶液C 30ml 用时加入35ml无水乙醇,充分混匀 5. 溶液D 3ml TE缓冲液 步骤: (一)从琼脂糖中纯化/回收DNA片段 1. 切取含DNA片段的琼脂糖(100mg~300mg)用吸头捣碎按重量比1:3(切取重量∶溶液A的体积比)加入溶液A。 2.65℃水溶5-10分钟,胶完全溶化即可,其间可振荡助溶2-3次,待溶化后置室温加入15ul溶液B,充分混匀。 注:如果体积大于500μl,可适当增加溶胶时间。 3. 将溶液置于离心柱中,静置2分钟,≥8000rpm 离心20-30秒,若一次加不完, 可分两次离心。 4.倒掉液体,加入500μl溶液C于离心柱中8000rpm离心 20-30秒,弃液体。 5.重复步骤4。 6. 12000rpm再次离心1分钟,甩干剩余液体以除去残余酒精。 7. 将离心柱置于新的离心管中,室温敞开离心管盖放置5~10分钟,使乙醇挥发殆尽。 8. 加入20~30ul溶液D(50℃水浴),静置2分钟。 9. 15000rpm离心1分钟,管底溶液即为所需DNA。 将DNA贮存于-20℃可长期保存. (二)从溶液中纯化回收DNA片段 1.在DNA溶液中加入3倍体积的溶液A,15ul溶液B,充分混匀。 2.其余步骤接(一)的步骤3。
注意事项: 1.电泳缓冲液可为TAE或TBE,但TAE效果最佳。 2.影响回收率和回收质量最主要因素是PH值和切胶薄厚。溶液A为橙黄色,有利于观察琼脂糖是否完全溶解, 也是pH指示剂。用户回收时当总体积大于500ul可适量多加溶液B;切胶越薄越好。 3.离心柱放入离心管中,若盖不上盖子,亦没有关系,可敞开盖离心。 4.水浴温度范围为50~65℃亦可,溶液D的用量视用户对DNA浓度要求而定。 5.收质量可用OD260/280比值来判断,本试剂盒所得DNA比值大于1.4,比值偏低主要是一些无机离子的存在, 不影响其他分子生物学操作,国内同类产品及一些低档进口产品OD260/280比值一般在1.1~1.4 之间。

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