概述：
本试剂盒能在半小时至一小时内提取50-250ml细菌的质粒，产量视质粒在细菌中拷贝数而定，一般为100ug，不需酚、氯仿抽提，不含RNA，蛋白质，有机质等的污染，适合各种分子生物学要求，此方法原理：本试剂盒所带Resin,质子化以后，具有在高盐、低PH值情况下吸附DNA，低盐、高PH值情况下释放DNA的性质。

组成:

1．离心柱     10个
2. 溶液A     10ml       RNase A(10mg/ml)   -20℃保存
3. 溶液B     50ml       50mM Tris-HCL, 10mM EDTA，10mg/ml溶菌酶，pH 8.0；4℃保存
4. 溶液C     90ml       0.2M NaOH, 10% SDS
5．溶液D     100ml      4M 盐酸胍，0.75M KAc PH 4.6
6. 溶液E     24ml       洗液Ⅱ（用时加入96ml无水乙醇，充分混匀）
7．溶液F     24ml       洗液Ⅲ（用时加入96ml无水乙醇，充分混匀）
8．溶液G     10ml       TE buffer（10mM Tris-HCl,1mM EDTA，PH 8.0）
9. 去蛋白质滤膜          2张(每次用完后用清水冲洗干净即可重复使用)
       
步骤：
1．按1:500～1:1000比例接菌种体于250ml选择性LB培养基中，37℃培养12~16小时。
   若想达到最大质粒拷贝效果，应注意：
    a) 培养容器为培养基体积2~4倍.
    b) 细菌密度最终能达到1×109cells/ml（OD600小于或等于4.0）。
    c) 起始菌体量与菌体浓度有关：菌体浓度高，起始量低一点; 菌体浓度低，起始量高一点。每一次的菌体范围在50-250ml內。
2. 5000 rpm，4℃离心5min，用50ml离心管收集菌体，最后一次离心收集之后要尽量将残余液体倒干。
3. 加入4ml溶液B，充分悬浮菌液。再加入1ml溶液A，室温静置40分钟以上。
4. 加入8ml溶液C，上下温和颠倒数次至溶液均匀，室温放置5分钟。
5. 加入9ml溶液D，立即反复颠倒数次，使其充分混匀为乳白色悬浊液而不分层。
6. 12000g，室温离心15分钟。
7. 将上清用一层去蛋白滤膜过滤到一个50ml离心管，再将上清分二次转移到离心柱中，静置2分钟。
8. 5000 rpm,离心2分钟。弃滤液。
9. 加入5ml溶液E，5000rpm，离心2分钟，弃滤液。
10. 重复步骤9。
11. 加入5ml溶液F，5000rpm，离心2分钟，弃滤液。
12. 重复步骤11。
13. 8000 rpm，离心5分钟以甩干剩余液体。
14. 将离心柱置于新的50ml离心管中，加入250μl 溶液G (50℃预热)，室温放置2～5分钟，8000 rpm离心5分钟。
15. 再向离心柱中加入250μl溶液G (50℃预热)，室温放置2～5min，8000 rpm离心5分钟。管底即为质粒DNA。

注：溶液G可用无菌双蒸水代替，加入体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。50℃预热，目的是提高产量，温度不需很准，50℃-60℃均可。

注意事项：
1. 细菌培养不要超过16小时，否则细菌会崩溃，引起细菌大量死亡，导致质粒丢失。
2. 抗生素浓度要正确，确保大肠杆菌含有目的质粒，具体浓度可参看各类工具书。
3. 250ml培养基菌液，可提取150~250μg高拷贝质粒，50~150μg低拷贝质粒。
4. 个别大肠杆菌RNA含量丰富，最后质粒会含有小量RNA，以后再提取时可将第3步延长一倍时间。
5. 此方法提取DNA质量非常高，适用于分子生物学任何实验要求，OD260/280≥1.5,一般情况能达到1.7～1.8,若比值偏低，可能是菌体密度太高所致，可适当减少振摇时间。
6. 此试剂盒最大得率为200μg，具体产量视菌量、质粒性质而定。