概述：
本试剂盒能在半小时至一小时内提取3-5ml细菌的质粒，产量视质粒在细菌中拷贝数而定，一般为15μg，不需酚、氯仿抽提，不含RNA，蛋白质，有机质等的污染，适合各种分子生物学要求。此方法原理：本试剂盒所带Resin质子化以后，具有在高盐、低pH值情况下吸附DNA，低盐、高pH值情况下释放DNA的性质。

组成：
1.  离心柱   50个     柱上含Resin(树脂)，最大吸附量15μg，4℃保存。
2． 溶液A　  0.6ml    RNase A 10mg/ml，-20℃保存。
3． 溶液B    9 ml     50mM Tris/HCL, 10mM EDTA，10mg/ml溶菌酶，pH 8.0，4℃保存。
4． 溶液C    18ml     1%SDS，0.2M NaOH(室温低于15℃时会有沉淀析出,加热溶解即可)。
5． 溶液D    24ml     4M 盐酸胍，0.75M KAc pH4.6。
6． 溶液E  　12ml     洗液II　( 用时加入96ml无水乙醇,充分混匀)。
7． 溶液F　　12ml　   洗液III（ 用时加入96ml无水乙醇，充分混匀）。
8． 溶液G    5 ml 　  TE 缓冲液（10mM Tris/HCL,1mM EDTA,pH8.0），4℃保存。

步骤：
1. 用1.5ml离心管收集3-5ml菌液，15000 rpm离心30秒,吸干上清。
  注：1.5ml离心管加入1.5ml菌液，离心收集，倒掉上清再加入1.5ml菌液，收集，如此反复。
2. 加入150μl 溶液B，10μl溶液A, 充分振荡悬浮,室温放置5分钟。
  注：悬浮细菌，消化RNA，若RNA含量很大，则消化时间可以延长。
3．加入300μl 溶液C，温和反复颠倒混匀4-6次。室温放置5分钟。
   注：混匀时用力不宜过度，看到溶液变粘即可。
4．加入450μl溶液D，反复颠倒混匀4-6次。
   注：此时可见白色絮状物，颠倒力度可以比上步剧烈。
5．≥12000 rpm离心5分钟，去沉淀。
6．将上清置于离心柱中,静置2分钟.
   注：此时离心柱置于2ml离心管中。
7．≥8000 rpm离心30秒，弃下清。
   注：此时DNA被吸附于离心柱中的Resin上。
8．加入500μl溶液E，≥8000 rpm离心30秒，弃下清。
   注：目的是将Resin上吸附的蛋白质、盐等杂质洗脱。
9．加入500μl溶液F，≥8000 rpm离心30秒，弃下清。
10. ≥12000 rpm再次离心1分钟以甩干剩余液体。
    注：主要是去掉残余酒精，以利DNA溶解。
11. 将离心管柱置于新的离心管中，室温敞开离心管盖放置5-10分钟，加入30～50μl溶液G（50℃预热）保温5分钟.≥12000 rpm离心1分钟,管底即为质粒DNA。
     注：溶液G可用无菌双蒸水代替，加入体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。50℃预热，目的是提高产量，温度不需很准，50℃～65℃均可。
12. 0.8% Agarose电泳，观察结果。

注意事项：
1．细菌培养不要超过16小时，否则细菌会崩溃，引起细菌大量死亡，导致质粒丢失。
2．抗生素浓度要正确，确保大肠杆菌含有目的质粒，具体浓度可参看各类工具书。
3．电泳若显示有残余RNA，则可延长“2”步保温时间。
4．若发现有染色体DNA（大分子DNA）污染，则可能是菌体太多或“3”步振荡过于剧烈，染色体DNA被打断。
5．此方法提取DNA质量非常高，适用于分子生物学任何实验要求，OD260/280≥1.5,一般情况能达到1.7～1.8，若比值偏低，可能是菌体密度太高所致，可适当减少振摇时间。此质粒若用来测序，可将第八、第九步各重复一遍，质粒的质量会更高。
6．此试剂盒最大得率为15μg，具体产量视菌量、质粒性质而定。