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A004-1 全血基因组DNA提取试剂盒(50次)
作者:周卫东 来自:未知 点击:0 时间:2006-7-11

试剂盒组成:

1.溶液A  25ml  5×STMT(用时按体积比1:4用灭菌双蒸水稀释)
 
2.溶液B  17ml      5N异硫氰酸胍
 
3. 溶液C  0.6ml     RNase A
 
4.溶液D  44ml      4N NaClO4  PH5.2
 
5. 溶液E  1.25ml    Resin(用时充分混匀)
 
6. 溶液F  30ml      洗液(用时加入40ml无水酒精)
 
7.溶液G  5ml       TE缓冲液
 

实验步骤:

(一)新鲜抗凝血或冷冻抗凝血

  1.取300μl全血,加入900μl 溶液A,温和混匀5~6次。

  2.室温或冰浴10分钟,≥8000rpm离心20~30秒,弃上清。

    注:1)若红细胞溶解不完全,则沉淀物发红,可再加900μl溶液A, 重复上述步骤一次。

         2)若全血在使用之前被冷冻,则需重复步骤1、2两次。

  3.加入300μl溶液B,温和振荡或反复用移液器吸打白色沉淀物4-6次,

     加入10μl溶液C,室温放置10分钟。

  4.加入800μl溶液D,20μl溶液E,混匀,室温放置5分钟。

  5.≥8000rpm离心30秒,弃上清。

  6.加入500μl溶液F,充分混匀,≥8000rpm离心30~60秒,弃上清。

  7.重复步骤6.

  8.≥12000rpm离心1分钟,吸干剩余液体。室温放置5~10分钟。

  9.加入50~100μl溶液G,混匀,50℃保温5~10分钟,≥12000rpm离心1分钟,吸取上清,即为DNA。       

 

(二)分离好的白细胞

1.取100ul白细胞,按1:3的比例直接加入溶液B,充分混匀,加入10μl溶 液 C,室温放置10分钟。

2. 其余接(一)的步骤4。

  注意事项:

1. 用户可视DNA浓度高低,适当调整溶液G的量。

2. 此方法提取DNA质量非常高,适用于分子生物学任何实验要求,OD260/280≥1.5,一般情况能达到1.7--1.8,若比值偏低,可能是溶血或储存时间过长。    


责任编辑:xoyu 文章页数第[1]页 


 
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  • 网友评论

    chengjianrong666@163.com:
       价格?

    大使馆似的:
       咋不说价格?

    QQ:
       多少钱呀


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