A004-2 全血基因组DNA提取试剂盒(100次)
作者:未知 来自:未知 点击:0 时间:2006-7-11
试剂盒组成: 1.溶液A 50ml 5XSTMT(用时1:4用灭菌双蒸水稀释) 2.溶液B 33ml 5N异硫氰酸胍 3. 溶液C 1.2ml RNase A 4.溶液D 88ml 4N NaClO4 PH5.2 5. 溶液E 2.5ml Resin(用时充分混匀) 6. 溶液F 60ml 洗液(用时加入70ml无水酒精) 7.溶液G 10ml TE 缓冲液 实验步骤: (一)新鲜抗凝血或冷冻抗凝血 1.取300μl全血,加入900μl 溶液A,温和混匀5~6次。 2.室温或冰浴10分钟,≥8000rpm离心20~30秒,弃上清。 注:1)若红细胞溶解不完全,则沉淀物发红,可再加900μl溶液A,重复上述步骤一次。 2)若全血在使用之前被冷冻,则需重复步骤1、2两次。 3.加入300μl溶液B,温和振荡或反复用移液器吸打白色沉淀物4~6次, 加入10μl溶液C,室温放置10分钟。 4.加入800μl溶液D,20μl溶液E,混匀,室温放置5分钟。 5.≥8000rpm离心30秒,弃上清。 6.加入500μl溶液F,充分混匀,≥8000rpm离心30~60秒,弃上清。 7.重复步骤6。 8.≥12000rpm离心1分钟,吸干剩余液体。室温放置5~10分钟。 9.加入50~100μl溶液G,混匀,50℃保温5~10分钟,≥12000rpm离心1分钟,吸取上清,即为DNA。 (二)分离好的白细胞 1.取100ul白细胞,按1:3的比例直接加入溶液B,充分混匀,加入10μl溶液C,室温放置10分钟。 2. 其余接(一)的步骤4。 注意事项: 1. 用户可视DNA浓度高低,适当调整溶液G的量。 2. 此方法提取DNA质量非常高,适用于分子生物学任何实验要求,OD260/280≥1.5,一般情况能达到1.7--1.8,若比值偏低,可能是溶血或储存时间过长。

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