A003-1 植物基因组DNA快速提取(20次)
作者:周卫东 来自:鼎国公司 点击:0 时间:2006-7-11
概述: 本方法可用于植物细胞DNA的快速提取,可提取107细胞,其质量能够满足各种分子生物学要求。 组成: 1.溶液A 0.5ml RNase A 10mg/ml。-20℃保存 2.溶液B 25ml 5N异硫氰酸胍3.溶液C 80ml 4N NaClO4 PH5.2 4.溶液D 1.2ml Resin用时充分混匀 5. 溶液E 20ml 洗液(用前加入30ml无水酒精,充分混匀) 6.溶液F 10ml TE buffer 步骤: 1. 组织≤0.5g,液氮研磨,加入1ml溶液B,反复混匀,室温5分钟。 2. 加入2.5ml溶液C,溶液A 20ul,充分混匀,室温放置20分钟。 3. ≥8000rpm离心3分钟。 4. 取上清,加入50ul溶液D,≥8000rpm离心1分钟,弃上清。 5. 加入800ul溶液C,混匀,≥8000rpm离心5分钟,弃上清。 6. 加入1ml溶液E,混匀,≥8000rpm离心30-60秒,弃上清。 7. 重复步骤6。 8. ≥12000rpm,离心30-60秒,吸干上清,室温敞开盖晾干约5-10分钟。 9. 取溶液F 200-300ul,混匀,40-50℃水浴3-5分钟。 10. ≥12000rpm离心30-60秒,取上清,即为DNA。 注: 1.组织若多,可适当加大溶液B和溶液D的用量,其它成份不变。 2.混匀一定要温和,否则DNA大分子将被打断,而部分降解。 3.适用新鲜组织、嫩组织,尽可能去除叶脉、叶柄。 4.液氮研磨一定要保证组织在研磨过程中形如干粉状。 5.用户可依实验需要,适当调整溶液F加入量,溶液F越少,DNA浓度越高,但产量略有损失,若想最大限度提高产量,可重复步骤9、10。两次所得DNA可合在一处。
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