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A003-1 植物基因组DNA快速提取(20次)
作者:周卫东 来自:鼎国公司 点击:0 时间:2006-7-11

概述:
本方法可用于植物细胞DNA的快速提取,可提取107细胞,其质量能够满足各种分子生物学要求。
组成:
1.溶液A    0.5ml    RNase A 10mg/ml。-20℃保存
2.溶液B    25ml     5N异硫氰酸胍3.溶液C    80ml     4N NaClO4  PH5.2
4.溶液D    1.2ml    Resin用时充分混匀
5. 溶液E     20ml     洗液(用前加入30ml无水酒精,充分混匀)
6.溶液F    10ml     TE buffer
步骤:
1. 组织≤0.5g,液氮研磨,加入1ml溶液B,反复混匀,室温5分钟。
2. 加入2.5ml溶液C,溶液A 20ul,充分混匀,室温放置20分钟。
3. ≥8000rpm离心3分钟。
4. 取上清,加入50ul溶液D,≥8000rpm离心1分钟,弃上清。
5. 加入800ul溶液C,混匀,≥8000rpm离心5分钟,弃上清。
6. 加入1ml溶液E,混匀,≥8000rpm离心30-60秒,弃上清。
7. 重复步骤6。
8. ≥12000rpm,离心30-60秒,吸干上清,室温敞开盖晾干约5-10分钟。
9. 取溶液F 200-300ul,混匀,40-50℃水浴3-5分钟。
10. ≥12000rpm离心30-60秒,取上清,即为DNA。
注:
1.组织若多,可适当加大溶液B和溶液D的用量,其它成份不变。
2.混匀一定要温和,否则DNA大分子将被打断,而部分降解。
3.适用新鲜组织、嫩组织,尽可能去除叶脉、叶柄。
4.液氮研磨一定要保证组织在研磨过程中形如干粉状。
5.用户可依实验需要,适当调整溶液F加入量,溶液F越少,DNA浓度越高,但产量略有损失,若想最大限度提高产量,可重复步骤9、10。两次所得DNA可合在一处。

责任编辑:xoyu 文章页数第[1]页 


 
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  • 网友评论

    祝红燕:
       你好,请问使用该试剂盒时,加入溶液D后,除了加之前充分混匀之外,还要注意什么事项?为什么我提时,除了在裂解液中检测到DNA带之外,在加过溶液D后的离心弃液以及最后的TE溶液中都没有DNA呢?


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