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A001 动物基因组DNA快速提取(20次)
作者:周卫东 来自:鼎国公司 点击:0 时间:2006-7-11

概述:
本方法用于动物组织基因DNA的快速提取,可提取107-108动物细胞,其质量能够满足各种分子生物学要求。
组成:
1.溶液A    0.5ml    RNase A 10mg/ml。-20℃保存
2.溶液B    25ml     5N异硫氰酸胍
3.溶液C    80ml     4N NaClO4  PH5.2
4.溶液D    1.2ml    Resin用时充分混匀
5.溶液E    20ml     洗液(用前加入30ml无水酒精,充分混匀)
6.溶液F    10ml     TE buffer
步骤:
1.称取100-300mg动物组织,液氮研磨成粉状,将粉末移入1.5ml离心管中,加入1ml溶液B,振荡混匀,室温放置5分钟。
2.12000rpm离心5分钟。
3.将上清移入5ml离心管中,加入2.5ml溶液C,20ul溶液A ,50μl溶液D,充分混匀,室温放置20分钟。
4. ≥8000rpm离心5分钟,弃上清。
5. 加入1ml溶液C,充分混匀,≥8000rpm离心1分钟,弃上清。
6.加入1ml溶液E,充分混匀,≥8000rpm离心1分钟,弃上清。
7.重复步骤6。
8. ≥12000rpm,离心1分钟,吸干上清,室温晾干约5-10分钟,使乙醇挥发殆尽。
9. 取溶液F 200-300ul,混匀,40-50℃水浴 5分钟。
10.≥12000rpm离心1分钟,取上清液即为DNA。
注:1.组织若多,可适当加大溶液B和溶液D的用量,其它成份不变。
    2.混匀一定要温和,否则DNA大分子将被打断使部分降解。
    3.用户可依实验需要,适当调整溶液F加入量,溶液F越少,DNA浓度越高,但产量略有损失,若想最大限度提高产量,可重复步骤9、10。两次所得DNA可合在一处。

责任编辑:xoyu 文章页数第[1]页 


 
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