发布日期:2025/2/8 16:53:00

 

在着手购买 DNA 引物之前,精准明确引物序列是关键步骤。通常情况下,优先参考已发表的高水准学术论文中所记载的引物信息,这些引物往往经过了一定的实践验证。然而,并非所有引物都能在文献中觅得踪迹,而且有时即便文献有所提及,其引物序列在实际应用中,也未必能完全契合我们的实验预期效果。鉴于此,自行设计引物序列,或是向专业生物公司提供目的基因名称,委托其帮忙设计并合成引物,便成了可行之举。

我司供应的引物,一般是以冻干粉的形态发货。这种形式的引物具备良好的稳定性,不仅便于运输,在存储保管方面也优势显著。同时,鉴于不同实验者对引物浓度以及具体实验用途有着多样化需求,冻干粉引物还支持自定义溶解,灵活性颇高。值得注意的是,冻干后的引物质地轻盈,且含量极少,刚收到货时,若不仔细端详,甚至很难察觉引物管内已然装有物品。

当客户顺利收到 DNA 引物后,可依照如下步骤规范使用:

  1. 引物准备
    • 仔细核验引物的包装完整性以及标签信息,务必保证所收到的引物准确无误,不存在任何差错,且未超出有效期。
    • 在开启引物管瓶盖进行溶解操作前,千万要记得将引物管置于离心机内,以 3000 - 4000 转 / 分的转速离心 1 分钟。如此操作,能够让引物粉末有效聚集到管底,避免开盖瞬间引物四处飘散造成损失。随后,依据引物说明书给出的推荐浓度,选用适配的溶剂(常见的如双蒸水或 TE 缓冲液)来溶解引物。一般而言,引物的储存液(即母液)浓度通常设定为 100μM(这里 μM 等同于 μmol/L,M = mol/L,换算下来 1μM = 1pmol/μL),而工作液浓度大多为 10μM。
    • 需将引物溶液轻柔地上下振荡,使之充分混匀溶解,接着再进行短暂离心,确保贴附在管壁上的溶液也能一并收集起来。
    • 倘若合成的引物 OD 数偏高,为减少反复冻融对引物质量的潜在影响,建议将引物溶液分装成若干小份。
  •           最后,把分装好的引物妥善存放于 - 20℃甚至更低温度的冰箱环境中,以维持其活性与稳定性。
  1. PCR 反应准备
    • 结合 PCR 实验的具体目标与要求,精心筹备 PCR 反应体系。这一体系涵盖了 DNA 模板、PCR 缓冲液、dNTPs(脱氧核糖核苷三磷酸)以及至关重要的引物。
    • 严格参照引物的推荐浓度,向 PCR 反应体系中精准加入适量的引物,确保用量恰到好处。
    • 对 PCR 反应体系内各组分的浓度与比例进行细致核对,保证其完全符合 PCR 反应的严苛要求,任何细微偏差都可能影响实验结果。
  1. PCR 反应设置
    • 依照实验规划,合理设置 PCR 仪的反应程序,包含预变性、变性、退火、延伸等一系列关键步骤。
    • 充分考量引物自身特性(如退火温度),针对性地对 PCR 反应程序中的退火温度与时间进行优化调整,确保引物能在最佳条件下发挥效能。
    • 完成上述步骤后,正式进行 PCR 反应,并在过程中密切留意反应进程,随时准备应对可能出现的异常情况。
  1. PCR 产物分析
    • 在 PCR 反应结束后,可以通过凝胶电泳等常规方法对 PCR 产物进行分析,通过电泳条带的呈现,初步判断产物的质量与纯度等关键指标。
    • 依据后续实验的深入需求,还能够对 PCR 产物采取进一步的精细处理,例如进行克隆操作以实现基因扩增,或是送去测序获取精准的基因序列信息等。

特别提醒,在使用 DNA 引物的全过程中,务必要严格遵循引物附带的使用说明,以及 PCR 反应既定的实验条件,以收获理想的实验成果。与此同时,在实验操作期间,必须严格遵守实验室的各项安全规定,全方位保障实验安全、有序推进。

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