端粒酶活性检测试剂盒（10T）

概述：
   粒酶是一种位于所有真核生物染色体末端的遗传成分。它通过防止DNA的异常重组和降解来保持染色质的稳定性和细胞的可变性。端粒酶是一依赖于RNA的DNA聚合酶，它合成于端粒的重复区的DNA链末端。在人体肿瘤细胞中测得端粒酶活性高达85%，这种超表达预示其可能对肿瘤细胞的增殖起重要作用。

    试剂盒组成：

1．溶液A（buffer A） 10ml 2．溶液B（buffer B） 4ml
3．溶液C（PCR液） 200ul 4．溶液D（Taq酶） 10ul
5．溶液E（CX引物） 10ul  
    实验步骤：
1）  a> 培养细胞：悬浮细胞直接3000rpm离心收集，贴壁细胞胰酶消化后离心收集,细胞数以5×106左右为宜。
     b> 组织块 ： 取新鲜组织或液氮保存或－70℃保存组织约50－100mg，液氮研磨。
       注：新鲜组织，用液氮可保存几年以上，－70℃可保存半年到一年。
       2)  加入1ml  buffer A,混匀，4℃放置15分钟。
       3)  12000rpm, 4℃ 离心5分钟，去上清。
       4)  加入100—200ul buffer B,混匀，4℃放置30分钟其间振动数次。
       5)  12000rpm, 4℃ 离心15分钟，弃沉淀，留取上清。
       6)  取2ul上清，加入20 ul PCR液，混匀， 20℃ 保存30分钟。
       7)  90℃ 保温3分钟。
       8)  加入1ul CX引物,1ul Taq酶,2滴石蜡油，离心数秒,
           按下列参数循环35轮：90℃  45秒  50℃ 45秒  72℃ 60秒
       9)  取15 ul PCR扩增产物，进行8% 聚丙酰胺电泳，银染观察结果。
       注：欲验证端粒酶的RNA特性，可进行如下操作:
    取RNase(10mg/ml),1ul 消化10ul 蛋白抽提物，37 ℃  20秒，
    取2 ul 从第6步开始操作。PCR产物无须上样缓冲液，可直接
    进行上样。蛋白量可以定量，每反应以加入6ul—20ul为宜。